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細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的無菌控制~操作間及超凈工作臺

更新時間:2022-04-25  |  點(diǎn)擊率:1143


支原體檢測與祛除試劑

通常情況下,細(xì)胞培養(yǎng)需要在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行,既包括無菌環(huán)境,也包括無菌操作。今天就“細(xì)胞培養(yǎng)過程中,環(huán)境的無菌控制"這一話題,給大家分享一些小技巧,希望可以給各位的實(shí)驗(yàn)提供幫助。

細(xì)胞培養(yǎng)所用的無菌室的結(jié)構(gòu):


一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。


無菌室需進(jìn)行定期消毒和防污染處理:


1、采用每日(使用前)紫外照射(1-2小時)。

2、每周甲醛或過氧乙酸熏蒸(2小時),如果為了節(jié)省時間,也可以每周用新潔爾滅擦拭地面墻壁、桌面方式進(jìn)行消毒。另外,在實(shí)際操作過程中,還應(yīng)考慮無菌室建筑材料的差異來選擇合適的消毒方法。

3、防止無菌室的污染:通風(fēng)系統(tǒng)出風(fēng)口濾膜定期更換;進(jìn)出無菌室時,避免外界空氣直接對流進(jìn)無菌室的操作間。

4、定期使用支原體祛除試劑對桌面進(jìn)行噴灑或擦拭。


MB Mycoplasma-off™

祛除支原體噴霧劑(實(shí)驗(yàn)環(huán)境用)

細(xì)胞培養(yǎng)所用的超凈工作臺

超凈工作臺的工作原理:

鼓風(fēng)機(jī)將外界空氣抽進(jìn)超凈臺,通過高效過濾器凈化,祛除空氣中的微生物,凈化的空氣吹過超凈臺的內(nèi)部空間,而將塵埃、細(xì)菌、病毒顆粒帶走,使工作區(qū)構(gòu)成無菌環(huán)境。

由于氣流在超凈工作臺中多的流動方向不同,因此可以將超凈工作臺分為側(cè)流式、直流式和外流式三種類型。


超凈臺的使用與保養(yǎng):

1、超凈臺的平均風(fēng)速一般保持在0.32-0.48米/秒,過大、過小均不利于保持臺面潔凈。

2、使用前建議開啟超凈臺內(nèi)紫外燈照射30分鐘,然后打開通風(fēng)系統(tǒng),讓超凈臺預(yù)工作3-5分鐘,以除去紫外線照射產(chǎn)生的臭氧。

3、使用完畢后,要用75%酒精將臺面和臺內(nèi)四周擦拭干凈,以保證超凈臺無菌。還要定期用支原體祛除試劑清潔超凈臺。

支原體常規(guī)PCR法其原理和熒光定量PCR是一樣的,根據(jù)支原體核糖體的特異保守序列設(shè)計(jì)引物,對待檢樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增,通過對擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出判斷。

它的優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確度很高,特別是德國MB的試劑盒,不僅qPCR的靈敏度可以達(dá)到10CFU/ml以上,普通PCR的靈敏度也可以達(dá)到各國藥典的這個要求。

特異性強(qiáng),*涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。

操作比qPCR多了個跑電泳的步驟。

時間短,2-3小時可以出結(jié)果。


唯yi的限制,因?yàn)闄z測的是支原體的DNA,所以無法區(qū)分活的支原體。但生物制品在生產(chǎn)過程中,本身不應(yīng)該產(chǎn)生支原體污染,污染過也不行,所以這個限制反而變成了優(yōu)點(diǎn)。


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