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支原體污染細(xì)胞的檢測(cè)方法及防治措施

更新時(shí)間:2025-01-15  |  點(diǎn)擊率:519
  支原體污染細(xì)胞是細(xì)胞培養(yǎng)和生物實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的一個(gè)問(wèn)題。支原體(Mycoplasma)是一類(lèi)非常小的原核生物,因其沒(méi)有細(xì)胞壁,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,容易在細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中生長(zhǎng)和繁殖,且通常不易被常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)方法察覺(jué)。支原體污染不僅會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和功能,還可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差,甚至影響實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性。為了保證細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性,了解支原體的特性、污染機(jī)制及其防治方法是非常重要的。
 

 

  支原體污染細(xì)胞的檢測(cè)方法:
  1.顯微鏡檢查法:利用染色法(如DAPI染色法)和熒光顯微鏡觀察細(xì)胞中是否存在支原體。這種方法可以直接觀察到支原體的存在,但靈敏度較低,且不適用于大規(guī)模篩查。
  2.培養(yǎng)法:將培養(yǎng)物接種于特殊的培養(yǎng)基上,進(jìn)行培養(yǎng)觀察。如果支原體存在,它們會(huì)在培養(yǎng)基中生長(zhǎng),并在幾天內(nèi)形成典型的菌落。這種方法對(duì)需要高靈敏度的檢測(cè)較為有效,但周期長(zhǎng),且操作復(fù)雜。
  3.PCR檢測(cè)法:通過(guò)PCR擴(kuò)增支原體基因序列,如16SrRNA基因,可以敏感且快速地檢測(cè)支原體污染。這是目前常用的支原體檢測(cè)方法,具有較高的靈敏度和特異性。
  4.酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA):該方法通過(guò)檢測(cè)支原體產(chǎn)生的特異性抗原或抗體進(jìn)行檢測(cè),雖然靈敏度較高,但仍不如PCR方法廣泛應(yīng)用。
  5.免疫熒光法:利用特異性的抗支原體抗體進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記,可以在細(xì)胞培養(yǎng)物中檢測(cè)到支原體。
  支原體污染細(xì)胞的防治措施:
  1.嚴(yán)格的無(wú)菌操作:培養(yǎng)過(guò)程中必須嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作,減少污染源。使用無(wú)菌的培養(yǎng)基、試劑以及滅菌處理過(guò)的實(shí)驗(yàn)工具,避免交叉污染。
  2.定期檢測(cè)細(xì)胞:細(xì)胞培養(yǎng)的定期檢測(cè)是確保無(wú)支原體污染的有效方法。尤其是在長(zhǎng)期培養(yǎng)的細(xì)胞系中,應(yīng)定期進(jìn)行支原體檢測(cè)。
  3.培養(yǎng)環(huán)境的控制:保持細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔,定期消毒并保證通風(fēng)良好,減少空氣中細(xì)菌和支原體的傳播。
  4.使用抗支原體藥物:有些實(shí)驗(yàn)室在細(xì)胞培養(yǎng)中會(huì)加入一些抗支原體藥物,如金霉素、磺胺類(lèi)藥物等,以防止支原體污染。然而,這些藥物不能全杜絕支原體污染,只能減緩其增長(zhǎng),且長(zhǎng)期使用可能對(duì)細(xì)胞有不良影響。
  5.更換污染細(xì)胞系:一旦發(fā)現(xiàn)支原體污染,應(yīng)該立即將受污染的細(xì)胞系隔離并處理掉,避免污染擴(kuò)散。對(duì)于已經(jīng)被污染的細(xì)胞,常常需要清除并重新從沒(méi)有污染的來(lái)源建立細(xì)胞系。
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